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本试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie Brilliant Blue G）法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度，其原理是考马斯亮蓝G-250可以在酸性条件下和蛋白质结合产生特殊的蓝色，最大吸收波长在595nm处。染色反应可在5-10分钟内完成，颜色能保持30分钟稳定，因此可通过比色分析在几分钟内快速测定蛋白质含量。本试剂盒含有配制好的考马斯亮蓝溶液和牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为50-1000μg/ml。

产品特点：
·快速方便：即开即用，操作简便。
·灵敏准确：测定范围是50-1000μg/ml（595nm读数），可检测25 μg/ml的蛋白质，在测定范围内有较好的线性关系，变异系数小。
·兼容性广：与其它蛋白浓度测定方法（如Lowry法）相比，该方法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中的DTT浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween-20，60和80低于0.06%，使用微板法测定时将体积按比例减小。

使用举例：


产品组成：

组分	规格
考马斯亮蓝染液	300ml
BSA标准溶液（1mg/ml)	10×1ml

保存条件：考马斯亮蓝染液4℃避光保存。牛血清白蛋白（BSA)溶液-20℃保存。

注意事项：
1．考马斯亮蓝染液与石英比色皿可以产生强烈的结合，因此建议使用玻璃或塑料比色皿。
2．疏水的膜或“粘”蛋白在考马斯亮蓝染液存在下可以形成沉淀，可以使用少量的NaOH促进蛋白的溶解。（在这种情况下向样品中加入等体积的1M NaOH)
3．由于不同蛋白与考马斯亮蓝染液的结合程度不同，因此使用被测蛋白做标准曲线，可以得到更准确的结果。
4．应按蛋白浓度由低到高的顺序进行测定，测定过程请连续进行，不要清洗比色皿，因为水质会影响测定结果。

操作步骤：
1．考马斯亮蓝染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀，预热分光光度计；
2．将0、10、20、30、40、50、60μl牛血清白蛋白（BSA)标准溶液（1mg/ml）分别加入到试管中，加入PBS补足到150 μl；
3．将适当体积的样品加入到试管中，并用PBS补足到150 μl；
4．向各试管中加入2.85ml考马斯亮蓝染液，混匀，室温放置5-10min；
5．用分光光度计测定595nm处的吸光值，并记录读数；以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。
6．绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
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